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蓝芩注射液对动物免疫功能的影响

   日期:2020-02-11     来源:互联网    编辑:admin    浏览:19    评论:0    
核心提示:畜禽传染病尤其是病毒性传染病是危害养殖业的重要疾病。尽管养殖场采取严格的防疫程序,但由于病原体的易变异性,或动物伴发免疫
畜禽传染病尤其是病毒性传染病是危害养殖业的重要疾病。尽管养殖场采取严格的防疫程序,但由于病原体的易变异性,或动物伴发免疫抑制性疾病,某些传染病仍然难以控制。中兽医界向来就有“扶正即可以祛邪,祛邪即可以安正”、“扶正以固本”等说法。现代研究也表明,配合免疫增强剂可以提高疫苗的防疫效果。

  据文献报道,许多中药和中药成分具有免疫增强作用,具有潜在的开发前景。鉴于上述原因,在免疫前后或治疗免疫抑制性疾病的过程中使用具有免疫增强作用的中草药,可以提高疫苗的免疫效果和药物的疗效。因此,本试验观察了蓝芩注射液对机体免疫功能的影响。

  1材料与方法

  1.1试验用药及准备蓝芩注射液由板蓝根、黄芩精制而成。试验前用生理盐水分别稀释成10mg/ml、20mg/ml、40mg/ml3种浓度的溶液,用于小鼠腹腔巨噬细胞吞噬试验。

  1.2主要试剂RpMI1640培养基,Gibco企业产品,按其说明用三重蒸馏水配制后过滤除菌,分装后4℃保存,临用前加小牛血清(杭州四季青生物制品厂)达10%和常规量的双抗。伴刀豆素球蛋白(ConA),用无血清RpMI1640培养液配成0.25mg/ml。四甲基偶氮唑蓝(MTT),Amresco企业产品,用pH7.4的pBS配成5mg/ml的溶液,0.22μm的微孔滤膜过滤,避光保存。淋巴细胞分离液,上海恒信化学试剂有限企业产品,批号20031210。裂解液,二甲亚砜(DMSO),分析纯,苏州正兴化工研究院产品。

  1.3主要仪器DG3022型酶联免疫检测仪,国营华东电子管厂产品;CO2培养箱,美国Revco企业生产;XSZD2型倒置显微镜,重庆光学仪器厂生产;752A型微量振荡器,上海医用分析仪器厂生产;722光栅分光光度计,上海第三分析仪器厂生产;96孔细胞培养板和6孔细胞培养板,德国Nunclon企业生产。

  1.4对淋巴细胞转化的影响

  1.4.1动物分组与处理1月龄长白猪20头,随机均分为4组,3个试验组分别注射蓝芩注射液,1.5ml/kg、1.0ml/kg、0.5ml/kg体重,对照组注射1.0ml/kg体重生理盐水,每天1次,连续3天。

  分别于试验前1天、末次用药后第3、6、9天无菌前腔静脉采血,5ml/只,肝素抗凝,测定淋巴细胞转化。

  1.4.2淋巴细胞活性测定用MTT法。将抗凝血样用Hank′s液稀释1倍,小心加在淋巴细胞分离液上层,2000r/min离心20min,汲取中间云雾状白细胞层,用无血清RpMI1640营养液洗2次,1500r/min离心15min。活细胞计数后,用RpMI1640培养液调整细胞浓度为2.5×106个/ml,加入到96孔细胞培养板中,80μl/孔,每孔再加20μlConA每个样品重复4孔,然后置于37℃、5%CO2培养箱中培养44h,〖Jp〗每孔加MTT20μl,继续培养4h后,每孔加裂解液100μl,将细胞板置于微量震荡器上震荡5min使沉淀完全溶解,在酶联免疫仪上检测570nm处的吸光(OD570)值,作为淋巴细胞转化的指标。

  计算4孔平均值和标准差,用SpSSApp统计分析,比较淋巴细胞转化情况。试验组OD值显著大于对照组,表明中药显著促进淋巴细胞转化;反之则表明显著抑制淋巴细胞转化。1.5对腹腔巨噬细胞吞噬作用的影响

  1.5.1动物分组与处理小鼠24只,购自江苏省农业科学院,平均体重20±2g,雌雄各半。随机均分为4组,3个试验组分别皮下注射不同浓度的蓝芩注射液稀释液0.5ml,分别相当于5mg/只、10mg/只、20mg/只;对照组注射等

量生理盐水,每天1次,连续3天。于末次给药后24h测定腹腔巨噬细胞吞噬活性。

  1.5.2巨噬细胞吞噬中性红的测定巨噬细胞制备、纯化、培养及吞噬中性红的测定参照文献。巨噬细胞浓度4×106/ml,中性红生理盐水浓度0.1%,每孔加细胞溶解液2ml。用722光栅分光光度计测定540nm处的吸光(OD540)值。

  2结果与分析

  2.1对淋巴细胞活性的影响见表1。

  由表1可见,除0.5ml/kg体重组在给药后D9时的OD值与对照组差异不显著外,其余各试验组均显著大于相应对照组,说明蓝芩注射液具有良好的促进ConA诱导的猪外周血T淋巴细胞转化的作用,且以中剂量的效果最佳。


  表1各组OD值的动态变化

  剂量(ml/kg体重)试验前给药后

D3D6D9
1.50.115±0.005a0.183±0.018b0.273±0.045b0.158±0.038ab
1.00.125±0.009a0.375±0.038a0.320±0.008a0.195±
0.01a
0.50.117±0.052a0.195±0.069b0.193±0.047c0.143±0.0
22bc
00.120±0.008a0.128±0.009c0.123±0.009d0.110±0.001

c注:同一列数据标注不同字母者表示差异显著(p<0.05)。

2.2对腹腔巨噬细胞吞噬活性的影响见表2。

  表2蓝芩注射液对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红活性的影响药物(mg/只)小鼠只数腹腔巨噬细胞吞噬活性
460.126±0.018*
260.359±0.037**
160.288±0.028*
060.223±0.030

*表示p<0.05,**表示p<0.01。

  由表2可见,不同剂量的蓝芩注射液对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红作用具有双向调节作用,低剂量可明显促进巨噬细胞吞噬功能,而高剂量对巨噬细胞吞噬功能有明显抑制作用。3讨论本研究表明,蓝芩注射液具有良好的促进ConA诱导的猪外周血T淋巴细胞转化的作用,且以中剂量的效果最佳。不同剂量的蓝芩注射液对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红作用具有双向调节作用,低剂量可明显促进巨噬细胞吞噬功能,而高剂量对巨噬细胞吞噬功能有明显抑制作用。
  板蓝根是指十字花科植物菘蓝的干燥根,为清热解毒之常用中药,含有多种化学成分。其中的多糖组分具有免疫调节作用,对特异性免疫和非特异性免疫、体液免疫或细胞免疫均有一定的促进作用。腹腔注射板蓝根多糖(IRpS)50mg/kg可显著促进小鼠的免疫功能,表现为显著增加正常小鼠脾重、白细胞总数及淋巴细胞数,对氢化可的松所致免疫功能抑制小鼠SI、白细胞总数和淋巴细胞数的降低有明显对抗作用;显著增强二硝基苯所致正常及Cy所致免疫抑制小鼠的迟发型过敏反应,诱导体内淋巴细胞转化和增强脾细胞中NKC活性;增加正常小鼠外周血淋巴细胞ANAE+百分率,并明显对抗氢化可的松所致的免疫抑制作用;但IRpS体外对ConA诱导的小鼠脾细胞淋转反应无明显增强,证明IRpS主要通过体内免疫系统起作用;此外,IRpS还能明显增强抗体形成细胞功能,增加小鼠静脉碳粒廓清速率。

  祖国医学文献中记载,黄芩具有抗炎抗变态反应、抗微生物、解热和利胆等作用,表明黄芩可对机体起免疫调节作用。黄芩苷为黄芩的主要有效成分之一。王新慧等研究证明,黄芩苷对小鼠红细胞免疫功能、T细胞亚群和体液免疫功能均具有调节作用。cAMp和cGMp是细胞内重要的生物活性物质,对生命现象起着重要调节作用。cAMp可促进淋巴细胞分化,诱导细胞终端分化,黄芩苷可明显增加小鼠脾脏单个核细胞内cAMp含量,表明黄芩苷对淋巴细胞分化具有调节作用。巨噬细胞在抗感染免疫,抗肿瘤免疫以及免疫应答调节方面起重要作用。黄芩苷体

内试验表明对小鼠腹腔巨噬细胞具有双向调节作用,低剂量可显著增加巨噬细胞吞噬中性红和溶菌酶含量,高剂量则起抑制作用。但体外用药则明显抑制巨噬细胞吞噬中性红,且有浓度依赖性。这种体内、外试验出现各不相同结果的原因可能是因为体内用药影响机体的整体调节或作用于体内某些调节因子;而体外用药不受其他因素干扰直接作用于巨噬细胞。黄芩苷体内用药可增高单个核细胞内cAMp含量,据此可以推测黄芩苷也可能影响巨噬细胞内cAMp含量,而cAMp水平增加可抑制巨噬细胞的吞噬功能和酶的释放。

 
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